Trabajo práctico N° 1 - Técnica histológica y microscopía

Histología

 En la imagen se muestra una fotografía de un preparado de ovario de rata con tinción tricrómica, observada con un objetivo de 5x

Tinciones: microscopio óptico

• Dicrómica: se utilizan colorantes como la eosina y la hematoxilina

1. Eosina: originalmente de color rosado. Tiene afinidad por las estructuras con carga positiva, tales como las membranas, mitocondrias, el REL, el citoesqueleto y los cilios. A estas, se las llama estructuras eosinófilas.
2. Hematoxilina: tiñe color azul (a veces también se ve violeta). Tiene mayor expresión en tejidos con carga negativa, como el núcleo, los ribosomas y el RER (los cuales se consideran elementos o estructuras basófilas).

Una excepción a estos colorantes, es el Aparato de Golgi, el cual es negativo a cualquiera de estas tinciones y solo puede verse a través del microscopio electrónico, en el óptico solo se observa un espacio blanco.

• Tricrómica: es un método de tinción histológica que utiliza dos o más tintes ácidos junto con un poliácido. Sirve para diferenciar con mayor facilidad las fibras de colágeno del resto de las estructuras (colorea el tejido muscular de rojo y el colágeno de verde o azul), se utiliza para detectar cambios fibróticos en la cirrosis hepática y distinguir tumores en células musculares y fibroblastos. Requiere de 3 colorantes

1. Fucsina ácida: tiñe color rojo. También puede utilizarse xilidina ponceau, cromótropo 2R, escarlata Biebrich, ponceau 6R o floxina
2. Azul de metilo: tiñe color azul o verde. Otras opciones son el azul agua, verde claro SF amarillento o Fast Green FCF 
3. Ácido pícrico: tiñe color amarillo. También se utilizan naranja G, amarillo de Martius, tartrazina o amarillo de molienda

Técnica histológica:

1. Obtención de la muestra
2. Fijación: la fijación tiene por objeto que las células se fijen y mueran en el mismo instante para evitar los fenómenos de muerte celular – que alteran las células y tejidos – y preservar la histología. Puede ser con formol, pero hay diferentes tipos de fijadores dependiendo de las coloraciones o posterior tratamiento de la muestra como inmuno detección de antígenos.
3. Deshidratación: en alcohol etílico de concentraciones crecientes.
4. Aclaramiento: en xilol que es solvente del alcohol y de la parafina.
5. Inclusión: en  parafina fundida (56°C).
6. Confección del taco de parafina.
7. Corte
8. Coloración: desparafinización, hidratación, tinción, deshidratación.
9. Montaje